]> source.charles.plessy.org Git - source.git/commitdiff
More details.
authorCharles Plessy <plessy@riken.jp>
Thu, 19 Apr 2018 04:39:20 +0000 (13:39 +0900)
committerCharles Plessy <plessy@riken.jp>
Thu, 19 Apr 2018 04:39:20 +0000 (13:39 +0900)
biblio/10518626.mdwn

index f69b0d85685255c1b06eb94f750fc80933a484e7..7c7c1f60adacd5e0273bb4e1bb4572c5a5013951 100644 (file)
@@ -1,5 +1,5 @@
 [[!meta title="CapSelect: a highly sensitive method for 5' CAP-dependent enrichment of full-length cDNA in PCR-mediated analysis of mRNAs."]]
-[[!tag cap method enzyme manganese]]
+[[!tag cap method reverse_transcription manganese template_switching]]
 
 Nucleic Acids Res. 1999 Nov 1;27(21):e31.
 
@@ -7,4 +7,4 @@ Schmidt WM, Mueller MW.
 
 CapSelect: a highly sensitive method for 5' CAP-dependent enrichment of full-length cDNA in PCR-mediated analysis of mRNAs.
 
-[[!pmid 10518626 desc="In presence of the 5' cap and Mn2+, the SuperScriptII enzyme adds 3-4 extra dC residues to the first strand cDNA."]]
+[[!pmid 10518626 desc="Extra cytosine are more frequently added in presence of the 5′ cap.  Increasing Mg2+ to 6 mM increases the frequency of addition of more than 1 C, but only moderately.  Instead, when adding BSA in the reaction, supplementing it with 1 or 2 mM Mn2+ after 1h, 3-4 extra dC residues are added to most of the first strand cDNAs.  Standard reaction: 0.75 μM oligo dT (or 0.25 μM gene-specific RT primer); 50 mM Tris-HCl (pH 8.3); 75 mM KCl; 3 mM MgCl2; 5 mM DTT; dNTPs 1mM each; 0.1 mg BSA; 20 U RNAse inhibitor (Roche), 200 U SuperScript II; 1h at 42 °C."]]